蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定技術(shù)流程
2021-04-15 9:44 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
蛋白質(zhì)組(Proteome)的概念,蕞早由澳大利亞Macquarie大學(xué)的Wilkins和Williams于1994年首先提出的,是指一個基因組(Genome),或一個細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)以細(xì)胞、組織或生物體全體蛋白質(zhì)為研究對象,通過高通量的色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測樣品所有蛋白質(zhì)及其變化規(guī)律,包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,利用生物信息技術(shù)從整體的角度獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過程的變化,闡明生-理或病理條件下的變化機(jī)制。
蛋白質(zhì)全譜和混合蛋白鑒定分析指的是對完整的組織、體液或其提取物混合蛋白的組分進(jìn)行分析,目的在于鑒定出盡可能多的肽段和蛋白質(zhì)分子。針對單一蛋白的鑒定,如考染及銀染的純化蛋白(不含戊二醛,戊二醛會與蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆交聯(lián),嚴(yán)重影響質(zhì)譜結(jié)果),對膠點或目的條帶進(jìn)行鑒定。針對混合蛋白樣本,可以收集其蛋白溶液及泳道等,利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用( HPLC-MS/MS )技術(shù),完成對樣本的定性分析。
蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定流程
(1)樣本中蛋白質(zhì)的提取與質(zhì)控(是否能染色;條帶清晰;目的條帶準(zhǔn)確);
(2)蛋白樣品酶解成肽段;
(3)肽段進(jìn)入液相質(zhì)譜聯(lián)用儀,先在液相中預(yù)分離;再進(jìn)入質(zhì)譜;
(4)經(jīng)過質(zhì)譜質(zhì)量分析器檢測器得到譜圖;
(5)譜圖信息經(jīng)過數(shù)據(jù)庫比對,得到肽段和蛋白的信息;
(6)生成樣品鑒定結(jié)果。