1.如何純化免疫球蛋白G（IgG）？

免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總含量的75%。血漿 B細胞可產生并釋放IgG分子，每個IgG具有兩個抗原結合位點。

IgG包含4種不同的亞型：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，它們的結構類似均由Fab區(qū)（上端，抗原結合區(qū)）、鉸鏈區(qū)和Fc區(qū)（下端，Fc受體結合區(qū)）組成，在這4種IgG抗體亞型中，IgG1和IgG3與Fc受體的親和力高于IgG2和IgG4，具有更強的激活抗體依賴的細胞毒性（ADCC）和補體依賴的細胞毒性（CDC）的能力；而IgG2和IgG4亞型與Fc受體的結合力低，其作用主要表現在Fab端的抗原結合能力上，即阻礙或抑制的效應功能。

2.如何純化免疫球蛋白M（IgM）？

IgM在Ig中分子量最大，通常稱為巨球蛋白，占血清Ig總量的10%。在電子顯微鏡下觀察，IgM由五個基本結構相同的單體組成。各單位間由一條連結鏈(J鏈)連結成“星狀”的五聚體。

IgM是在個體發(fā)育過程中最早產生的抗體，也是經抗原刺激的動物體內最先出現的抗體，主要由脾臟和淋巴結中漿細胞分泌合成。

3.如何純化人免疫球蛋白A（IgA）？

IgA在正常人血清中的含量僅次于IgG，占血清免疫球蛋白含量的10~20%。從結構來看，IgA有單體、雙體、三體及多聚體之分。市場上由于缺乏合適和高容量的親和樹脂，IgA成為抗體純化的難題。

以下人IgA純化試劑盒和樹脂填料:

cat#LT-146KIT 人IgA純化試劑盒（含微型離心柱）

cat#LT-146 人IgA松散樹脂5ml

cat#LT-146-1x1ml 1mL人IgA純化預裝柱

特點：LigaTrap的IgA純化樹脂具有≥15mg IgA/mL樹脂的結合能力，遠遠超過了其他常用于IgA純化的凝集素樹脂的結合力，最重要的是，LigaTrap IgA純化樹脂不需要使用基于糖（半乳糖，蔗糖……）的洗脫緩沖液，因此簡化了進一步的下游處理。

4.如何純化雞免疫球蛋白Y（IgY）？

IgY，由兩條重鏈(H)和輕鏈(L)組成，重鏈(υ)由一個可變區(qū)(V)和4個恒定區(qū)(C)組成，沒有鉸鏈結構。IgY普遍存在于鳥類、爬行動物和兩棲類，在功能上等價于哺乳動物IgG，但其許多生物學性質仍未被發(fā)現。

近來許多研究者分析了IgY的基因組成和生物學功能，而且證實其為哺乳動物IgG和IgE的直接起源。因為抗原免疫的母雞所產生的雞蛋黃中含有豐富的免疫球蛋白IgY，因此，雞正逐漸成為定制研究抗體來源的常用種屬。

5.抗體親和材料——Protein A

對于IgG的純化，除了介紹過的樹脂純化方法，大部分情況下我們都會選擇使用Protein A或Protein G進行親和層析。因為它們對于IgG的Fc段具有特異性的親和作用，而對于其他雜蛋白沒有或者只有很弱的結合。

蛋白A (Protein A) (cat#7300-01S,Protein A-UNLB)來源于金黃色葡萄球菌的一個株系，它含有5個可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結合的結構域。Protein A作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質上，可以特異性的和樣品中的抗體分子結合，而使其他雜蛋白流穿，具有極高的選擇性。1個Protein A分子至少可以結合2個IgG。

除了IgG，Protein A也可以結合另一些免疫球蛋白，如用于某些種屬的IgA、IgM的純化。重組Protein A的C-端新增一個Cysteine，可以單一位點定向偶聯(lián)于瓊脂糖基架上，降低與抗體接觸的空間位阻。

6.抗體親和材料——Protein G

對于IgG的純化，除了介紹過的樹脂純化方法，大部分情況下我們都會選擇使用Protein A或Protein G進行親和層析。因為它們對于IgG的Fc段具有特異性的親和作用，而對于其他雜蛋白沒有或者只有很弱的結合。

蛋白G(Protein G)(cat#7406-01S ,Protein G-UNLB)是從G類鏈球菌（Streptococci）中分離出來的胞壁蛋白，分子量25kDa。相對于Protein A，Protein G對于大多數哺乳動物的IgG有著更高的親和力，尤其是對于IgG的亞基，如人 IgG3，小鼠IgG1和鼠 IgG2a。

因此，Protein G可用于純化不能與Protein A很好結合的哺乳動物單抗和多抗IgG。

7.如何基于磁珠實現分離純化和富集？

Protein A通過共價偶聯(lián)到磁珠上形成的親和純化介質，具有快速磁響應性，高蛋白結合能力和低非特異結合，可與大多數哺乳動物IgG的Fc片段特異性結合。

偶聯(lián)Protein A 的磁珠可快速有效地從腹水、血清或細胞培養(yǎng)液等生物樣品中分離和純化免疫球蛋白，也可通過抗原抗體結合從生物樣品中免疫沉淀靶蛋白。通過簡單的磁性吸附即可輕松純化抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。