提取的基因組DNA有降解咋辦?
2021-07-27 11:34 作者:洛辰 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
DNA降解的因素:
外界物理因素:溫度、濕度
化學(xué)因素:pH值、水解反應(yīng)、氧化反應(yīng)
生物因素:酶解及微生物侵染等作用。
這些因素都直接與DNA的構(gòu)型、分子組成有關(guān)
DNA分子結(jié)構(gòu):
DNA是由許多脫氧核苷酸殘基按一定順序彼此用3’,5’-磷酸二酯鍵相連構(gòu)成的長(zhǎng)鏈。
[形成鏈的作用力——磷酸二脂鍵,易被水解];
大多數(shù)DNA含有兩條這樣的長(zhǎng)鏈
[兩條鏈間以氫鍵相連接——?dú)滏I在強(qiáng)電解質(zhì)環(huán)境,尤其在高酸度環(huán)境內(nèi)易開(kāi)鍵]
也有的DNA為單鏈,如大腸桿菌噬菌體φX174、G4、M13等。有的DNA為環(huán)形,有的DNA為線形。
選取的材料不新鮮或反復(fù)凍融,采集材料后未及時(shí)處理或未低溫保存:陳舊血液或不新鮮的材料中,細(xì)胞凋亡導(dǎo)致DNA降解,或者低溫保存的樣品經(jīng)反復(fù)凍融導(dǎo)致細(xì)胞破碎,內(nèi)源性核酸酶降解DNA,因此應(yīng)該選用新鮮的材料樣品,不能及時(shí)處理則低溫保存,運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)該使用干冰:
1 ) 未能有效的抑制內(nèi)源性核酸酶的作用:
某些DNase含量豐富的動(dòng)植物組織樣品應(yīng)在液氮中研磨或勻漿,研磨過(guò)稱(chēng)中隨時(shí)補(bǔ)充液氮,并在樣品未完全解凍之前加入含有抑制核酸酶作用的裂解液。
2 ) 操作過(guò)于劇烈導(dǎo)致 DNA 被機(jī)械打斷:
預(yù)處理的樣品應(yīng)該加入細(xì)胞裂解以后,所有操作應(yīng)該盡量柔和,避免劇烈振蕩。