產(chǎn)品儲(chǔ)存
1.感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸，融化后的感受態(tài)細(xì)胞不能再凍結(jié)儲(chǔ)存。如果用戶收到感受態(tài)細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)泡沫箱中的干冰已經(jīng)揮發(fā)殆盡，應(yīng)予以拒收。
2.收到感受態(tài)細(xì)胞后應(yīng)立即儲(chǔ)存在-70℃以下的冰箱中，在6個(gè)月內(nèi)使用不影響轉(zhuǎn)化效率；感受態(tài)細(xì)胞不可反復(fù)凍融，不要與限制性內(nèi)切酶等經(jīng)常使用的分子生物學(xué)試劑放在一起，避免因溫度的波動(dòng)而影響的效率。

JM109菌株介紹
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi-1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac-proAB）/F’[traD36，proAB ，lacIq，lacZΔM15]。 特 點(diǎn)： 本菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進(jìn)行α-互補(bǔ)，從而顯示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)    
1. 使用1 ng pUC19 Plasmid質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化100 ?l Competent Cells DH5α測試，產(chǎn)生的菌落數(shù) ＞1×108 transformants/1?g pUC19 Plasmid 。            
2. β-半乳糖苷酶、α-互補(bǔ)性的確認(rèn)：對(duì)E.coli Competent Cells JM109使用pUC19 DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化后，在含有100 ?g/ml的Ampicillin、40?g/ml的X-Gal的L-瓊脂平板培養(yǎng)基上，產(chǎn)生藍(lán)色菌落。
3. 100 ?l的E.coli Competent Cells JM109在含有 100 ?g/ml Ampicillin的L-瓊脂平板培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)40 hr不產(chǎn)生菌落。

用戶需自備的試劑與物品
1. 試劑：LB液體與固體培養(yǎng)基、抗生素。
2. 物品：彎頭玻棒鋪菌器、碎冰、水浴鍋、超凈工作臺(tái)、搖床、移液器與無菌槍頭、無菌1.5ml離心管、臺(tái)式小量離心機(jī)（可配1.5ml離心管和2ml離心管的轉(zhuǎn)子）。
3. 篩選藍(lán)白斑所需：X-gal、IPTG。

使用前準(zhǔn)備
1. 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃取出立即置于冰上凍融，將水浴鍋溫度設(shè)置為42℃或?qū)⑾鄳?yīng)抗生素平板溫育至37℃。
2. 相應(yīng)抗生素溶液、24mg/ml的IPTG溶液及20mg/ml的X-gal溶液。注意20mg/ml的X-gal溶液要避光保存。

常規(guī)操作
1.從-70℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化,如需分裝可將剛?cè)诨募?xì)胞懸 液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,再置于冰浴中。
 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用 DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實(shí)驗(yàn)以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例。
2.向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(1-10 ng,且體積<10 ?l),輕輕旋轉(zhuǎn)離 心管以混勻內(nèi)容物,冰浴30分鐘。
轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大時(shí)反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。  
3. 將離心管置于42℃水浴中90秒，迅速將管轉(zhuǎn)移到冰上3分鐘。注意該過程不要搖動(dòng)離心管。
4. 向離心管中加入900 μl 無菌LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘）。 該步驟的目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5. 將已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞低速離心（5000 rpm, 4分鐘）后棄掉部分上清，保留100-150μl培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打懸浮菌體后，全部加到含相應(yīng)抗生素的LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，或含X-gal、IPTG及相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面，用無菌彎頭玻棒鋪菌器將細(xì)胞均勻涂開。
如果預(yù)計(jì)的單克隆數(shù)量較多，可省略離心步驟，直接取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板（過多的菌液涂布可能會(huì)使單克隆菌落粘連在一起，難以挑?。?。涂布后剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布至新的平板上。
 6. 將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)可出現(xiàn)單菌落或藍(lán)白斑。  簡易操作步驟 此步驟不適用某些抗生素抗性的質(zhì)粒（比如卡那霉素抗性），若出現(xiàn)轉(zhuǎn)化異常，請(qǐng)用常規(guī)步驟操作。

簡易操作步驟
此步驟不適用某些抗生素抗性的質(zhì)粒(比如卡那霉素抗性),若出現(xiàn)轉(zhuǎn)化異常,請(qǐng)用常規(guī) 步驟操作。
1. 將選擇性固體培養(yǎng)基放于培養(yǎng)箱中預(yù)熱至 37℃。
2. 從-70℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化,如需分裝可將剛?cè)诨募?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，在置于冰浴中。
3.向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA(1-10 ng,且體積<10 ?l),輕輕旋轉(zhuǎn)離 心管以混勻內(nèi)容物,冰浴3-5分鐘。
轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大時(shí)反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。  
4. 取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞直接涂布到預(yù)熱至37℃含相應(yīng)抗生素的LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，或含X-gal、IPTG及相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面，用無菌彎頭玻棒鋪菌器將細(xì)胞均勻涂開。
5. 將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)可出現(xiàn)單菌落或藍(lán)白斑。