瓊脂糖凝膠2B使用方法
2022-01-06 13:50 作者:洛辰 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
中文名稱:瓊脂糖凝膠2B
英文名稱:Sepharose 2B
規(guī)格:BR
貨號(hào):YM-A3467G
包裝:100ml、500ml
性狀:白色微球, 無(wú)嗅、無(wú)味
凝膠類型:凝膠過(guò)濾填料,凝膠層析介質(zhì)
結(jié)構(gòu)成分:2%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:60-200μm
工作PH值:4-9
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-40 ×106
保存條件:4℃~25℃
應(yīng)用:蛋白、大分子復(fù)合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測(cè)定等。
本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì),非特異性吸附低,回收率高,可多次重復(fù)使用等特點(diǎn),用于分子量差異大、對(duì)分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。
1、裝柱
凝膠過(guò)濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過(guò)柱子上加一個(gè)裝柱器來(lái)使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。以下過(guò)程為通用介質(zhì)裝填過(guò)程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
(2)選擇一根一定直徑的柱子,長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。不要?jiǎng)×覕噭?dòng),以免攪壞微球。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液緩慢流過(guò),使柱床穩(wěn)定。
(6)最好用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。
2、平衡
讓緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。
3、上樣
(1)樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理,再上樣。
(2)介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的,分子量大的先流出來(lái)。
(3)上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。
4、洗脫
用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
5、再生
一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。
6、注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。