產(chǎn)品名稱：苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B
性狀：白色微球，凝膠狀，保存在20%酒精溶液中
凝膠類型：疏水層析填料
結(jié)構(gòu)成分：4%交聯(lián)瓊脂糖
粒徑： 45-165um
工作PH值：3-12（短時(shí)間）;4-12（長(zhǎng)時(shí)間）
操作溫度：4-40℃
配基密度：35μmol/mL
保存條件：4～25℃密閉保存
應(yīng)用：疏水層析介質(zhì)，適合含芳香族配體蛋白純化，特別適合單抗的純化等。

簡(jiǎn)介
苯基-瓊脂糖凝膠CL-4B是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠CL-4B上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。

適用范圍
苯基瓊脂糖凝膠是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。-CL-4B用于生物大分子的純化分離。

操作步驟
1、裝柱
（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。
（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
（5）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

2、平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液， 如0.02 ~ 0.05mol/l的 PBS加1 ~ 2.5mol/l (NH4) 2SO4等。

3、上樣
（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。

4、洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。最常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

5、再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6、在位清洗
（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。
（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1MNaOH去除。
（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7、注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，起泡進(jìn)入。

8、去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5-6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：
（1）2倍柱體積的70%乙醇
（2）2倍柱體積50mM Tris-HCI pH7.5
（3）1倍柱體積4M尿素
（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

9、消毒
用0.5~1M NaOH 室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。