無淀粉改良羅氏培養(yǎng)基說明書
2022-03-11 16:38 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
中文名稱:無淀粉改良羅氏培養(yǎng)基
產(chǎn)品規(guī)格:250g
保質(zhì)期:三年
產(chǎn)品用途:用于結(jié)核桿菌分離培養(yǎng)
無淀粉改良羅氏培養(yǎng)基是結(jié)核桿菌分離培養(yǎng)的分離鑒定培養(yǎng)基。無淀粉改良羅氏培養(yǎng)基全稱羅-琴(L-J)培養(yǎng)基(Lowenstein-Jenden medium)主要組成分新鮮雞蛋液、谷氨酸鈉、甘油、孔雀石綠、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸鎂。
分枝桿菌等痰液細(xì)菌在人工培養(yǎng)時(shí),必須有足夠的營養(yǎng)成分。谷氨酸鈉為細(xì)菌生長提供氮源;雞卵液不僅是良好的營養(yǎng)物質(zhì),而且還能降低脂肪酸的毒性;甘油和枸櫞酸鹽可補(bǔ)充碳源;鉀、鎂、磷、硫等無機(jī)鹽也是細(xì)菌生長不可缺乏的生長元素;磷酸鹽有緩沖作用;因此,培養(yǎng)基能提供大多數(shù)分枝桿菌良好的生長環(huán)境。結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略帶彎曲的桿菌,大小1~4X0.4μm。分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高,約占干重的60%,特別是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包圍在肽聚糖層的外面,可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法,以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上,但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍(lán)復(fù)染,則分枝桿菌呈紅色,而其他細(xì)菌和背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。本菌無芽孢、無鞭毛。結(jié)核分枝桿菌最適溫度為37℃,低于30℃不生長。結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量較高,影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,故生長緩慢。在一般培養(yǎng)基中每分裂1代需時(shí)18~24小時(shí),營養(yǎng)豐富時(shí)只需5小時(shí)。
應(yīng)用說明:用于對羅氏培養(yǎng)基進(jìn)一步改良的初步研究
雞蛋為基礎(chǔ)的羅氏(Lowenstein Jensen,L-J)培養(yǎng)基作為培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌的一種固體培養(yǎng)基一直被廣泛地應(yīng)用于臨床,它是目前培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌最為常用的培養(yǎng)基之一,也是最有代表性的一種,具有價(jià)廉、制作方法簡便、便于觀察菌落形態(tài)等特點(diǎn)。因?yàn)槠涑煞謨?nèi)添加了抑制普通細(xì)菌生長的孔雀綠,所以羅氏培養(yǎng)基上罕有普通細(xì)菌(霉菌除外)生長的報(bào)道。在羅氏培養(yǎng)基成分中添加不同的抑菌物質(zhì)觀察該鏈球菌與結(jié)核菌的生長情況方法:收集臨床分離的人型(M.TB)、牛型(M.b)結(jié)核分枝桿菌、鏈球菌(S)各一株,H37Rv結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌株作為質(zhì)控菌種,共4株分別接種于添加50.0(mg/ml)羧芐青霉素(Carbenicillin,以下簡稱為C)和/或硒酸鈉5、10、20(μg/ml)羅氏培養(yǎng)基上,以未作接種的該羅氏培養(yǎng)基作為空白對照,37?0.2℃培養(yǎng)4周觀察菌落生長情況。結(jié)果:新改良的羅氏培養(yǎng)基中加入的羧芐青霉素(C)和一定量的硒酸鈉對該鏈球菌均有不同程度的抑制作用,而含20(μg/ml)硒酸鈉、羧芐青霉素(C)+10(μg/ml)硒酸鈉或羧芐青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸鈉均可完全抑制該鏈球菌的生長;除含20(μg/ml)硒酸鈉和羧芐青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸鈉兩種羅氏培養(yǎng)基對3株結(jié)核分枝桿菌有輕度抑制作用外,其余均對結(jié)核分枝桿菌生長無明顯影響。